盡管沒有“路線圖"詳細(xì)說明獲得監(jiān)管部門批準(zhǔn)進(jìn)入臨床所需的研究，但??FDA、EMA 和 PMDA 最近發(fā)布的文件強(qiáng)調(diào)了 候選藥物的代謝和藥物相互作用 (DDI)的潛力。

FDA 2020 年最終確定的行業(yè)指南強(qiáng)調(diào)了臨床前開發(fā)中 DDI 成分的重要性和標(biāo)準(zhǔn)化，指出“對 DDI 的研究不充分可能會阻礙 FDA 確定研究藥物的益處和風(fēng)險的能力，并可能導(dǎo)致限制性標(biāo)簽、上市后要求或承諾"和/或推遲批準(zhǔn)，直到獲得有關(guān) DDI 的足夠信息。"? 

臨床前數(shù)據(jù)包中藥物相互作用研究的目的是通過基于風(fēng)險的方法預(yù)測與伴隨藥物發(fā)生有害相互作用的可能性，從而防止患者不必要地被排除在臨床試驗(yàn)之外。 

監(jiān)管機(jī)構(gòu)已發(fā)布了關(guān)鍵指導(dǎo)文件，供藥物開發(fā)商用于規(guī)劃這些關(guān)鍵的臨床前檢測。例如，2020 年 1 月，F(xiàn)DA 發(fā)布了行業(yè)最終指南“體外代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物相互作用研究"，其重點(diǎn)是?體外實(shí)驗(yàn)，以評估涉及藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的 DDI 潛力。體外結(jié)果如何以基于風(fēng)險的方法為臨床 DDI 研究計劃提供信息。最終指南是 2017 年指南草案的更新。全球三大主要機(jī)構(gòu)（FDA、EMA、PMDA）之間的期望差異以及 2017 年至 2020 年 FDA 指南的具體更新可以從Brian Ogilvie 博士和 XenoTech 創(chuàng)始人 Andrew Parkinson 博士 ?制作的?2020 年海報中看出?。

基本體外 DDI 研究： 

• 血漿蛋白結(jié)合

• 滲透性

• 代謝穩(wěn)定性

• 代謝物鑒定（Met ID）

• 反應(yīng)表型分析

• CYP酶抑制

• CYP酶誘導(dǎo)

• 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制

• 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)底物

初步測定： 

研究：?血漿蛋白結(jié)合

目的：?確定血漿中可用于人類和臨床前物種的靶標(biāo)和脫靶相互作用的結(jié)合藥物和游離藥物的百分比 

體外研究期望： ?“在開始人體臨床試驗(yàn)之前，通常應(yīng)評估動物和人類的體外代謝和血漿蛋白結(jié)合數(shù)據(jù)以及用于重復(fù)劑量毒性研究的物種的全身暴露數(shù)據(jù)。" ¹

研究： 滲透性

目的：?測量滲透性以預(yù)測腸道吸收和組織分布 

體外研究預(yù)期：?研究人員測量測試物品跨細(xì)胞系（例如 Caco-2 或 MDCKII 細(xì)胞）或人工膜（例如 PAMPA）的滲透性，并與高滲透性和低滲透性對照進(jìn)行比較。 

研究： 代謝穩(wěn)定性

目的：?測量人類和臨床前物種的體外內(nèi)在清除率 

體外研究預(yù)期：?將測試品與混合的微粒體、S9、血漿或肝細(xì)胞一起孵育，以確定清除率。經(jīng)過處理的測試系統(tǒng)用于比較母體化合物與藥物代謝酶相互作用之前和之后的濃度，以確定細(xì)胞/細(xì)胞器內(nèi)是否存在顯著的代謝。 

研究：?代謝物表征/鑒定 (Met ID)

目的： ?“確定藥物產(chǎn)生的代謝物的數(shù)量和結(jié)構(gòu)，以及代謝途徑是平行的還是順序的" 

體外研究期望： ?FDA 建議盡早進(jìn)行代謝物表征和鑒定（“我們鼓勵在藥物開發(fā)過程中盡早鑒定用于非臨床安全評估的動物與人類之間藥物代謝的任何差異。" ²）建議的測試系統(tǒng)包括人肝細(xì)胞、人肝微粒體或重組酶系統(tǒng)。 

代謝介導(dǎo)的藥物相互作用： 

研究：?反應(yīng)表型

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的底物" 

體外研究期望：?在兩個都認(rèn)可的測試系統(tǒng)中監(jiān)測底物損失或代謝物形成的有效方法。申辦者“應(yīng)該同時使用"經(jīng)過驗(yàn)證的、可重復(fù)的分析方法：人肝微粒體（+10 名供體）、人重組 CYP 酶。如果某種酶對藥物消除的貢獻(xiàn)率>25%，則需要進(jìn)行臨床 DDI 研究。 

標(biāo)準(zhǔn)：主要細(xì)胞色素 P450 酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5） 

如果合適的話，還可以添加：其他 CYP（CYP2A6、CYP2J2、CYP4F2、CYP2E1）、I 期酶（MAO、FMO、XO、AO）、II 期酶（UGT） 

研究：? CYP 酶抑制

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的抑制劑" 

體外研究預(yù)期：?對 7 個主要 CYP（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5）具有可逆（直接）和 TDI（時間依賴性抑制）。測試系統(tǒng)包括人肝微粒體、重組CYP表達(dá)系統(tǒng)的微粒體、肝細(xì)胞。 

研究： CYP?酶誘導(dǎo)

目的： ?“確定研究藥物是否是代謝酶的誘導(dǎo)劑" 

體外研究預(yù)期：  標(biāo)準(zhǔn)：主要 CYP（CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4/5）的誘導(dǎo)潛力 

如果合適的話，還可以補(bǔ)充：如果 CYP3A4/5 產(chǎn)生陽性誘導(dǎo)結(jié)果，則跟進(jìn) CYP2C 家族（CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19） 

測試系統(tǒng)包括來自至少三個供體的可平板冷凍保存或新鮮分離的人肝細(xì)胞或永生化肝細(xì)胞。 

轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的藥物相互作用： 

研究： 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制

目的：? “確定研究藥物是否是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抑制劑" 

體外研究預(yù)期：?轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究的時間建議可能會根據(jù)化合物的分子特性而有所不同（“每種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的體外評估時間可能會根據(jù)研究藥物的治療適應(yīng)癥而有所不同"）以及當(dāng)前的指導(dǎo)建議針對每種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白類型使用不同的測試系統(tǒng)。 

標(biāo)準(zhǔn)：P-gp、BCRP、OATP1B1、OATP1B3、OCT2、MATE1、MATE2-K、OAT1、OAT3 

附加（如果適用）：BSEP、OCT1 ³

研究：?藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白底物

目的： ?“確定研究藥物是否是轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的底物" 

體外研究預(yù)期：   ABC/外排：P-gp和BCRP（但不推薦用于高溶解性、高滲透性藥物） 

SLC/攝取：如果肝臟（OATP1B1、OATP1B3）和腎臟（OAT1、OAT3、OCT2、MATE1、MATE2-K）底物電位表明肝臟攝取/消除，則應(yīng)根據(jù) ADME（吸收、分布、代謝、排泄）數(shù)據(jù)進(jìn)行評估或腎分泌顯著。